摘要 我們使用螢光共振能量轉移和免疫共沉澱來分析擬南芥異源三聚體 G 蛋白的 α、β 和 γ 1 亞基之

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• 類型：已發表論文
• 日期：2022-09-02

摘要

我們使用螢光共振能量轉移和免疫共沉澱來分析擬南芥異源三聚體 G 蛋白的 α、β 和 γ 1 亞基之間的相互作用。使用青色和黃色螢光蛋白融合構建體，我們表明過度表現的 G(gamma 1) 定位於原生質體膜，但僅當 G gamma(1) 蛋白共過度表現時，G beta 才表現出膜定位。過度表現的 G α 顯示膜定位，但不伴隨 G β 或 G γ 的過度表現 (1)。我們檢測到在沒有 G α 過度表現的情況下 G beta 和 G gamma (1) 之間以及 G α 和 G gamma (1) 之間的螢光共振能量轉移，但僅當所有三個亞基共同過度表現時。 G α 和G β 皆與質膜中類似700 kDa 的大分子複合物相關。 G α 既存在於大型複合物中，也以遊離 G α 形式存在於野生型植物的質膜中。在 G β 基因無效等位基因純合的植物中，G α 與 200-400 kDa 範圍內的較小複合物相關，表明其在大複合物中的存在取決於與 G β γ 的關聯。用鳥苷 5'-3-O-(硫代)三磷酸 (GTP gamma S) 活化 G α 亞基會導致 G α 從複合物中部分解離。過氧化氫 (H2O2) 促進 G α 複合物的廣泛解離，但不干擾 GTP γ S 與純化的重組 G α 的結合，顯示活性氧會影響大複合物的穩定性，但不影響 G α 本身的活性。