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論文資訊
- 類型：已發表論文
- 日期：2022-09-02
摘要
背景 INA-6 人類多發性骨髓瘤細胞的存活嚴格依賴白血球介素 6 活化的轉錄因子 STAT3。儘管轉錄分析揭示了許多受 STAT3 調節的基因，但迄今為止，尚無已知編碼蛋白質的 STAT3 標靶基因可介導 INA-6 細胞的存活。因此，本文的目的是鑑定和分析非蛋白質編碼 STAT3 標靶基因。除了致癌的 microRNA-21 之外，我們先前也描述了 STAT3 誘導的 5 種長非編碼 RNA（lncRNA），稱為 STAiR。在這裡，我們將重點放在 STAT3 誘導的 RNA 18 (STAiR18)，這是一種在人類譜系中複製的 mRNA 樣長 ncRNA。一個 STAiR18 位點被註釋為已經詳細描述的 LINC00152/CYTOR，然而，另一個位點包含 MIR4435-2HG 基因，並且到目前為止幾乎沒有被描述。方法使用CAPTURE-RNA定序分析STAiR18轉錄物結構。為了鑑定 STAiR18 和 STAT3 表型，進行了基於 siRNA 的敲低，並應用微陣列來鑑定其目標基因。 STAiR18 的 RNA 結合伴侶透過 RNA 純化染色質分離 (ChIRP) 和隨後的定序來確定。透過免疫印跡、染色質和 RNA 免疫沉澱研究了 STAT3 表現對 STAiR18 的依賴性。結果透過 CAPTURE-RNA 定序鑑定，複雜的剪接模式源自於兩個 STAiR18 位點，產生不同的轉錄物。最豐富的 STAiR18 同工型的敲除顯著降低了 INA-6 細胞活力，顯示其在骨髓瘤細胞中的功能作用。此外，STAiR18 和 STAT3 敲低在 INA-6 細胞中產生了轉錄模式的重疊變化，顯示這兩個因子之間存在密切的功能交互作用。此外，透過 RNA 純化 (ChIRP) 分離染色質，然後進行全基因組 RNA 定序顯示 STAiR18 與 STAT3 初級轉錄物特異性相關。此外，STAiR18 的敲除降低了 RNA 和蛋白質水平上的 STAT3 水平，顯示這兩個分子之間存在正回饋。此外，STAiR18 敲低改變了 STAT3 位點的組蛋白甲基化狀態，這解釋了正回饋並表明 STAiR18 是一種表觀遺傳調節劑。結論 因此，STAiR18 是骨髓瘤細胞存活的重要調節因子，並且與 STAT3 的致癌功能密切相關。 STAT3 和 STAiR18 之間密切的功能交互作用顯示長 ncRNA 和訊號路徑之間的調控交互作用的新原理。